国产主播免费在线一区二区-亚洲综合久久一本久道-国产免费在线成年人视频-欧美国产激情一区二区三区

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁 > 技術(shù)與支持 > 細(xì)胞冷凍過程注意事項(xiàng)
細(xì)胞冷凍過程注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):329 更新時間:2024-10-14

    一個實(shí)驗(yàn)室得到一個新的細(xì)胞株后,首先要把該細(xì)胞株培養(yǎng)擴(kuò)增后凍存起來。細(xì)胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細(xì)胞時有備份可用,另外幾乎所有細(xì)胞在培養(yǎng)傳代的過程中發(fā)生一定程度的變異,為了保持實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致,一般細(xì)胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了,需要將凍存的,傳代較少的細(xì)胞化凍培養(yǎng)再使用。細(xì)胞冷凍過程有四個要點(diǎn):細(xì)胞的收獲、保護(hù)劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。 


1、 細(xì)胞的收獲

用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候,這時細(xì)胞生長狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。

 

2、保護(hù)劑的使用

細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。

 

3、細(xì)胞凍存的速率

細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時,再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。

 

4、儲存環(huán)境

細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

 

注意事項(xiàng):

1. 細(xì)胞凍存原則為“慢凍",即讓細(xì)胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。當(dāng)細(xì)胞快速冷凍時,水和離子往往會留在細(xì)胞中,細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成會撕裂和刺穿細(xì)胞膜。相反,如果細(xì)胞冷凍太過緩慢,則細(xì)胞外的水會在細(xì)胞內(nèi)冰形成之前結(jié)冰。這允許水通過滲透作用逸出,但增加了可能有毒的細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)的濃度。因此對于大多數(shù)細(xì)胞,最佳冷凍速率在每分鐘1℃之間。

2. DMSO能夠快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞中,延緩溫度下降速度,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而起到保護(hù)細(xì)胞的作用。

3. 凍存可用10%~90%的血清,一般高濃度血清有助于維護(hù)細(xì)胞活力,此處介紹20%終濃度有利于細(xì)胞懸浮而少沉積(4℃時),復(fù)蘇存活率在80%~90%,對原代培養(yǎng)細(xì)胞,以90%血清凍存更為有效。

4. 細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清液,減少培養(yǎng)基殘留,避免稀釋凍存液。

5. DMSO溶于培養(yǎng)基時,將釋放大量熱量,所以細(xì)胞凍存液需提前配制,冷卻后再使用,不能直接將DMSO加入含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中,避免燙傷細(xì)胞。

6. 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇過程中,不可避免會損失部分細(xì)胞,所以凍存的密度不能太低。推薦密度為300-500w/mL。

7. 細(xì)胞懸液加入凍存液以后盡量短時間的在常溫放置,DMSO常溫下對細(xì)胞損傷大,分裝完成后立即轉(zhuǎn)入程序降溫盒。

 


色婷婷精品综合久久狠狠| 男人午夜福利视频在线观看| 中文乱码字幕亚洲精品| 久久国产精品成人免费蜜臀| 92午夜福利精品视频| 一区二区三区日韩专区| 精品国产综合一区二区三区| 精品少妇人妻av蜜桃| 中文字幕午夜av福利| 日本高清一区二区网站| 日韩精品极品在线免费视频| 日韩三级在线观看av| 人妻熟妇一区二区三区成人| 天天操夜夜操狠狠操91| 欧美成人精品三级在线网站| 亚洲六月丁香六月婷婷| 国产成人精品久久性色av| 国产精品十八禁在线看| 男女性情视频免费大全网站| 一区二区尤物区亚洲国产精品区| 97福利影院在线观看| 日本一区二区欧美亚洲国产| 亚洲天堂精品日韩电影| 日韩精品诱惑一区二区| 日韩黄片大全在线观看| 九九九热精品视频在线观看| 色呦呦一区二区三区视频| 国产农村妇女一区二区三区| 亚洲国产区男人的天堂| 厕所偷拍视频一区二区三区| av色狠狠一区二区三区| 国产91黑丝在线视频| 很黄无遮挡在线免费网站| 日本高清一区二区高清| 日韩精品国产亚洲欧美| 2018在线不卡爱视频| 亚洲一本一道久久香蕉| 日本又色又爽又黄又高潮| 少妇欧美日韩精品在线观看 | 偷窥偷拍视频一区二区| 久久精品一区欧美成人|