試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱(chēng)：Caspase-3活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

規(guī)格：24樣 48樣

貨號(hào)：AS394

檢測(cè)方法：可見(jiàn)分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類(lèi)：醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)代謝指標(biāo)

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個(gè)月。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。

所需的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。

phospho-RPS6KB1(Ser427)  磷化核糖體S6激抗體 規(guī)格: 0.1ml

CD25/IL-2RA  白介2受體a鏈抗體 IL-2Ra 規(guī)格: 0.1ml

S100A14  S100A14/15抗體 規(guī)格: 0.1ml

DSCC1  DSCC1抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009)  磷化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml

RGS5  G信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子5抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-human IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

CAP2  環(huán)化相關(guān)CAP-2抗體 規(guī)格: 0.2ml

RAB35  RAS相關(guān)基因Rab35抗體 規(guī)格: 0.2ml

ALDH1B1  乙醛脫5抗體 規(guī)格: 0.1mlF1 operon positive regulatory protein  肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜抗體（C端） 規(guī)格: 0.2ml

phospho-FADD(Ser194)  磷化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgM/AP  性磷（AP）標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

CD146/MCAM  黑色瘤細(xì)胞粘附分子CD146抗體 規(guī)格: 0.1mlCytochrome P450 2D1  YP2D1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Caspase-3活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)105471-98-5木通B;Calceoriosid 規(guī)格： 20mg

24939-17-1去甲氧基姜黃 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

50-55-5 規(guī)格： 100mg

7061-54-3根皮 規(guī)格： 20mg

22172-17-4甲基當(dāng)藥寧 規(guī)格： 10mg

67979-25-3橙黃決明 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

遼東楤木皂V 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

孟多酯 規(guī)格： 100mg

白鮮 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/支

19130-96-21-脫氧野尻 規(guī)格： 20mg

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。